Molekularna Diagnostika: PCR v realnem času

Trenutno molekularna diagnostika mehanizem zasnovan verižne reakcije s polimerazo (PCR), ki je bila spodbuda za razvoj številnih metodah diagnosticiranja bolezni, ki temelji na določitvi genskega materiala. Za izvedbo PCR v realnem času z uporabo fragment gena (zlasti nukleinske kisline) povzročitelja, ki ga ne najdemo v drugih posameznikov.

Načelo PCR je množenje neke milijonov patogen DNA fragment po roki z DNA polimerazo v posebni enoti, ki se imenuje termalnega ciklerja, ki zagotavlja ciklično ponavljanje režima temperaturi in določenem programu.

Diagnostika PCR omogoča ponovimo serijo ojačanj, ohranjanje encimsko aktivnost. Ko je ojačanje poteka nemoteno, v enem ciklu število izvodov posameznega kosa DNK dvojic patogenih organizmov, po tridesetih ciklih - sto in deset. To je razlog, zakaj je PCR uporablja pri diagnozi za določitev dovolj majhne patogene, katerih identifikacija je nemogoče brez nje.

Opozoriti je treba, da se RNK ne more biti model za PCR v realnem času. Zato, da bi odkrili virusne RNA pred pomnoževanjem, da se DNA, ki korelira z ustrezno fragment njo. verižne reakcije s polimerazo omogoča proizvodnjo DNA in RNA merilno patogen. Tako dobljeni podatki se uporabljajo za spremljanje učinkovitosti zdravljenja, ki se uporablja, in oceno kliničnega prognozo.

Poleg tega, PCR v realnem času ne zahteva dodatnih ukrepov, ki zadevajo odkodiranje ciljne DNK ali pomnožkov, ki služi kot ovira za pravilno diagnozo in vodi do napačnih rezultatov. Ta pristop nam omogoča, da ne uporabljajo fazo elektroforezo, ki vodi do zmanjšanim tveganjem okužbe z verižno reakcijo s polimerazo. Prav tako zaradi zmanjšanja števila manipulacij s sredstvom, zmanjšuje čas raziskave, poenostavlja postopek, zmanjša verjetnost napak. PCR tudi omogoča, da določite začetno število kopij DNK patogena v klinično preskušanje, za pomoč pri identifikaciji obdobja poslabšanj in pravočasno sprejmejo ukrepe za ozdravitev bolnika.

Do danes, obstaja veliko načinov snemanja v realnem času ojačanja. Najpogosteje se uporabljajo različne tehnike nanašanja amplikon korelacija fluorogena sondami, intenzivnost sevanja, ki je odvisna od kopičenja amplikona in so navedene v realnem času z uporabo posebne naprave, ki se imenuje termocikler z optičnim modulom. To zagotavlja visoko stopnjo občutljivosti analize. Hkrati produkta PCR je mogoče zaznati, skupaj z veliko količino stranskih proizvodov, v času, ko se uporablja elektroforeza je v nekaterih primerih ni opazil.

Ko PCR v realnem času s pomočjo pozitivne in negativne kontrolne vzorce. Na primer, pozitivne in negativne vzorce v raziskavi analizirali kot posameznih vzorcev, referenčnega vzorca pri istem dodan vsakemu vzorcu in podajo vse faze analize časa.

Danes obstaja veliko število pripomočkov za izvedbo polimerazne verižne reakcije. Ti vključujejo Bio-Rad, Applied Biosystems, Cepheid in Roche. Vsak od njih ima svoje prednosti in slabosti

Opozoriti je treba, da PCR - metoda diagnosticiranja v velikih znanstvenih, raziskovalnih in diagnostičnih centrov po vsem svetu, saj daje priložnost za izvedbo takojšnjo razlago rezultatov.