Verižna reakcija s polimerazo in njegovo naravo in obseg

Verižna reakcija s polimerazo (PCR) - metoda molekularne biologije, ki omogoča, da zazna v biološkem materialu majhnimi količinami kislino (DNA), ali bolje, nekatere njegove fragmente, in jih pomnožimo večkrat. Nato so vidno označene z gelsko elektroforezo. Reakcija je bila razvita leta 1983, ki ga K. Mullis in vključena v seznam odprtih odkritij v zadnjih letih.

Kaj so PCR mehanizmi

Celoten postopek temelji na sposobnosti nukleinskih kislin z osebnim ponovitev, da v tem primeru potekala umetno v laboratoriju. replikacijo DNK ne more začeti vsako regijo molekule, vendar le v območjih s specifično zaporedje nukleotidov - izhodnih fragmentov. Da bi verižno reakcijo s polimerazo se je začelo, moramo začetnih oligonukleotidov (ali sonde DNA). To so kratki fragmenti DNA sekvenc s isto nukleotidno sekvenco. So komplementarni (t.j., kar ustreza) začetek odsekov vzorca DNA.

Seveda, ustvariti primerje, morajo znanstveniki študija zaporedje nukleotidov nukleinske kisline, ki sodeluje v postopku. Te DNA sonde zagotovi specifičnost reakcije in njenem začetku. Verižna reakcija s polimerazo ne bo šel, če vzorec ne najde vsaj eno molekulo želene DNA. Na splošno velja, da reakcijo zahteva zgoraj primerje, niz nukleotidov, odporen na vročino, DNA polimeraze. Slednji je encim - katalitične reakcije sinteze novih molekul nukleinske kisline na osnovi vzorca. Vse te snovi, vključno biološkega materiala, ki so potrebni za identifikacijo DNA združimo v reakcijski zmesi (raztopina). To se nahaja v posebnem termostat, ki opravlja svoje zelo hitro ogrevanje in hlajenje v določenem času - cikel. Običajno so 30-50.

Kako je to reakcija

Bistvo tega je, da v enem ciklu, se primerji pritrjeni na dele želene DNA, po katerem izbil je podvojitev z encimom. Na osnovi izhajajo pramenov DNA, sintetizirane v naslednjih ciklih več in več kosov enakih molekul.

Verižna reakcija s polimerazo dosledno povrnjeni po svoje korake. To označena s prvim podvoji količino proizvoda med vsakim ciklom ogrevanja in hlajenja. V drugem koraku reakcije pride do pojemka saj encim je poškodovan in izgubil aktivnost. Poleg tega osiromašenega zaloge nukleotidov in začetnih oligonukleotidov. V zadnji fazi - Planota - izdelki niso več kopičijo kot reagenti konec.

Kjer se uporablja,

Nedvomno najširša uporaba verižne reakcije s polimerazo najde v medicini in znanosti. Uporablja se v javnem in zasebnem biologije, veterine, farmacije, in celo ekologije. Medtem ko slednji delajo za nadzor kakovosti hrane in okoljskih objektov. Aktivno uporablja verižne reakcije s polimerazo v forenzično praksi za potrditev očetovstva in ugotavljanje identitete osebe. V forenzične znanosti, kot tudi v paleontologije, pogosto je ta metoda je edini način, saj je ponavadi na voljo za študij zelo majhne količine DNA. Seveda pa je zelo razširjena metoda našli v medicinski praksi. Jo je potrebno na področjih, kot so genetika, infekcijskih in rakavih bolezni.